Identification and expression analysis of goose type lysozyme in half smooth tongue sole (Cynoglossus semilaevis)

Lysozymes are considered to be potent innate immune molecules against the invasion of bacterial pathogens. The goose-type lysozyme is one of the three major distinct lysozyme types identified in the animal kingdom including teleosts. In this report, we identified, sequenced, and characterized the goosetype lysozyme gene (CsGLys) from half-smooth tongue sole (Cynoglossus semilaevis). The full-length cDNA of CsGLys is 1191 bp in length from the transcription start site to polyadenylation site, including a 91 bp 50-terminal untranslated region (UTR), a 452 bp 30-terminal UTR and a 648 bp open reading frame (ORF) of encoding a polypeptide with 215 amino acids. The deduced amino acid sequence of CsGLys possesses a Goose Egg White Lysozyme (GEWL) domain with three conserved residues (E91, D104 and D121) essential for catalytic activity. The CsGLys gene consisting of 2535 bp, was similar to those of other teleost species such as Japanese flounder and large yellow croaker with five exons...

MHC polymorphism and disease-resistance to Edwardsiella tarda in six turbot (Scophthalmus maximus) families

作　　者：

DU Min, CHEN SongLin, LIU YanHong, NIU BaoZhen, YANG JingFeng &

摘　　要：

This study examined genetic variation in the major histocompatibility complex (MHC) Class II B gene in turbot (Scophthalmus maximus) by virulent bacterial pathogen challenge. One hundred fry from each of six families were infected with Edwardsiella tarda by intraperitoneal injection. Family mortality ranged from 28.0% to 83.3%. Complete exon 2 and intron 1 sequences of MHC Class II B genes were amplified from five survivor and five non-survivor individuals per family using the clone-sequence method. Thirty-seven sequences from 60 individuals revealed 37 different alleles, 25 of which were unique to this study. The 25 unique alleles belonged to 16 major allele types. Nine alleles were used to examine the association between alleles and resistance/susceptibility to disease. Five alleles were present in an individual, suggesting a minimum of three loci or copies of the turbot MHC Class II B gene. The rate of non-synonymous substitution (dN) was 2.30 and 1.58 times higher...

牙鲆胚胎冷凍損傷的觀察

作　　者：

王春花，田永勝

摘　　要：

為了觀察牙鲆胚胎在冷凍保存過程中的形態受損情況，將其浸入20％PM(20％丙二醇和20％甲醇1：l的混合液)中平衡，并用程序化法和玻璃化法對其冷凍保存2h后解凍，用攝影顯微鏡記錄其在抗凍劑里平衡時和冷凍保存后的形態。結果顯示在平衡過程中胚胎卵膜出現凹陷(稱為溶液損傷)，但可以恢復；在冷凍過程出現胞內冰損傷，是致命的；用程序化法冷凍保存的尾芽期胚胎卵膜和卵黃完好，胚體邊緣受傷；用玻璃化法保存的尾芽期胚胎，卵膜和卵黃損傷較重，胚體損傷較輕；因此將玻璃化法和程序化法結合可以達到揚長避短的效果。

牙鲆胚胎程序化冷凍保存研究

作　　者：	王春花，陳松林，田永勝，劉本偉，鄧寒
摘　　要：	以牙鲆胚胎為材料 ,對胚胎程序化冷凍保存的主要環節進行了探討 ,以優化牙鲆胚胎的程序化超低溫冷凍保存法。單一抗凍劑的毒性試驗表明甲醇(Methanol) 、 1 ,22丙二醇( PG)的毒性低于其他抗凍劑的毒性。

牙鲆胚胎玻璃化冷凍技術研究

作　　者：	田永勝，陳松林，嚴安生
摘　　要：	對名優經濟魚類牙鲆（Paralichthys Oliuaceus）胚胎的玻璃化冷凍技術方法進行了研究。篩選出了適合于牙鲆胚胎平衡和培養的基礎液 BS2，對牙鲆不同時期胚胎在玻璃化液 VS2中的耐受能力進行了研究

牙鲆胚胎玻璃化冷凍及解凍過程中的溫度因子與玻璃化率

作　　者：

田永勝，劉本偉，陳松林

摘　　要：

為避免魚類胚胎玻璃化冷凍過程中脫玻璃化現象發生，本文對冷凍過程中溫度變化及解凍方法進行了研究。在室溫13℃下，將含有玻璃化液FVS3的麥管直接投入到一196℃ 的液氮中，麥管內溫度達到一196℃ 時，所用的時間為15．46±1．38 s，降溫速率為800。C／rain。對玻璃化麥管在35～45。C水浴中解凍時間進行測定。結果顯示，解凍所需時間在6．17～7．94 S之間，麥管從一196℃升高到13。C的解凍速率為1 500~2 000。C／rain。當水浴溫度從37℃逐步升高到72。C時，對水浴表面蒸氣溫度的變化進行了測定，相應水溫下蒸氣溫度從25．47℃升高到38．6。C。在麥管中加入不同濃度的玻璃化液FVS1、FVS2、FVs3和FVS4進行玻璃化冷凍，然后將麥管分別在37℃ 水浴中和28．6℃的蒸氣中解凍時玻璃化率進行研究。結果顯示，在蒸氣中解凍時的玻璃化率明顯高于水浴中解凍；麥管玻璃化率在水浴中解凍時不穩定，在蒸氣中解凍時表現穩定，玻璃化率隨著玻璃化液濃度的升高有逐漸升高的趨勢。對含有牙鲆胚胎的玻璃化冷凍麥管分別在37℃水浴和28．6℃蒸氣中解凍，結果表明，蒸氣中解凍時的玻璃化率同樣明顯高于水浴中解凍。

顯微注射抗凍劑對牙鲆(Paralichthys olivaceus)胚胎毒性及冷敏感性的影響

作　　者：

姜靜，田永勝，翟介明，陳松林

摘　　要：

：在魚類胚胎冷凍保存中，由于胚胎體積大、卵膜具多層結構，并且通透性差，傳統的平衡法無法使抗凍劑足夠、有效的進入胚胎內部起到保護作用。為彌補了普通平衡法的不足，此研究利用顯微注射技術，將抗凍劑直接注射到魚類胚胎卵黃囊內，提高了抗凍劑對胚胎的保護程度。此研究以牙鲆胚胎為試驗材料，對顯微注射抗凍劑種類、抗凍劑的注射劑量、注射濃度、以及抗凍劑注射后胚胎的冷敏感性影響進行了篩選。結果表明：牙鲆胚胎較適宜的顯微注射劑量為750pl；幾種抗凍劑注射牙鲆胚胎后的毒性大小相對排列為PVP>蔗糖，DMSO>MeOH>PG，其中注射PG獲得的胚胎成活率和孵化率最高，注射PVP獲得的胚胎成活率和孵化率最低，而PG與MeOH組成混合抗凍劑PM毒性更低獲得的胚胎成活率和孵化率更高。而任何一種抗凍劑均隨著濃度的增加其毒性隨之增加；另外，在冷敏感試驗中，顯微注射6 mol／L的PM的胚胎胚胎，應用程序化法處理，以2~C／min的速率由室溫降至一20℃ ，平衡10 min后解凍處理，發現注射PM的胚胎低溫處理后成活率為(25．07~1．57)％，而6mol／的PM五步平衡法同步處理的對照組胚胎成活率為(20．88士2．84)％，說明顯微注射的胚胎冷敏感性一定降低。

鱸魚胚胎的玻璃化冷凍保存

作　　者：	田永勝，陳松林，嚴安生，季相山，于過才
摘　　要：	本文對鱸魚 ( L ateolabrax japonicus) 胚胎進行了玻璃化冷凍保存研究 , 篩選出了濃度較低、玻璃化程度較穩定的5 種玻璃化液 , 冷凍時形成玻璃化的概率在4811 %～100 % , 在35～43 ℃ 的水浴中解凍時保持玻璃化的概率在 4414 %～6310 %;

鱸魚胚胎程序化冷凍保存的研究

作　　者：	于過才陳松林孔曉瑜田永勝季相山
摘　　要：	對鱸魚（Lateolabrax japonicus）胚胎的程序降溫冷凍保存進行了研究。通過稀釋液的篩選實驗，選擇了一種培養效果好的稀釋液 DS1 液。

鱸魚冷凍精子誘導半滑舌鰨胚胎發育

作　　者：	田永勝陳松林邵長偉劉本偉　莊志猛
摘　　要：	半滑舌鰨是分布在我國黃、渤海的特有魚類 ,雌魚明顯具有較雄魚生長快的特點 ,利用雌核發育方法誘導產生半滑舌鰨超雌魚 ,通過與正常雄魚交配 ,最終可培育生長速度快、個體大的全雌性后代 ,對于提高養殖效益具有重要的意義。

花鱸冷凍精子誘導漠斑牙鲆雌核發育

作　　者：	楊景峰，陳松林，徐亙博，蘇鵬志，田永勝，翟介明，李波
摘　　要：	魚類雌核發育工作開始于 20 世紀 50 年代，首先在淡水魚類遺傳育種的相關研究中迅速開展，由于其母本遺傳的特殊性，雌核發育技術在基因作圖與純系的快速建立、生產單性種群等方面有廣泛的應用前景［ 1］

花鱸冷凍精液受精魚苗與鮮精受精魚苗的同工酶比較分析

作　　者：

陳艷翠，高天翔，陳松林，季相山，田永勝，鄧寒

摘　　要：

采用水平凝膠電泳技術對花鱸(Lateolabrax maculatus)冷凍精液受精魚苗與鮮精受精魚苗進行了同工酶分析。本實驗選取肌肉和肝臟兩種組織，檢測了IDHP、PGM、LDH、GPI、MDH、G3PDH、ME、HK、SOD、G6PD和SDH等11種酶，得到13個位點：IDHP 、PGM一1 、PGM．2 、LDH 、GPI-1 、GPI-2 、MDH 、G3PDH 、ME 、HK 、SOD 、C．6PD 和SDH 。結果顯示在0．99水平，SDH 和PGM一2 位點在兩種受精魚苗中均表現為多態，多態位點比例均為0．1538；平均預期雜合度分別為0．0460和0．0407，但未觀測到雜合子，觀測雜合度均為0，遺傳偏離指數均為一1；有效等位基因數分別為1．0720和1．0850，花鱸冷凍精液受精魚苗與鮮精受精魚苗的遺傳相似度為0．9991，遺傳距離為0．0010

額爾齊斯河江鱈精子冷凍保存研究

作　　者：

田永勝，姜靜，馬允，向偉，李勝忠，馬驍，高堅，范鎮民，錢龍

摘　　要：

齊斯河中蘊藏著豐富的冷水魚類種質資源，江鱈(厶施fo把)是其中之一，建立其精子冷凍保存技術和精子冷凍庫，對種質資源保存具有重要意義。本研究利用無機鹽、葡萄糖、蔗糖、胎牛血清等配制7種精子稀釋液，以5：1的比例稀釋精液，激活后觀察統計精子活力。結果顯示，江鱈精子僅在SS、D15和CM中具有(13．33±2．89)％～(8．33±2．88)％活

超低溫冷凍保存對七帶石斑魚胚胎酶活性的影響

作　　者：

姜靜，田永勝，翟介明，陳松林， JIANG Jing， TIAN Yong-Sheng， ZHAI Jie-Ming， CHEN Song- Lin

摘　　要：

帶石斑魚(印i唧^ek sep￡e，咖sc泐凇)是一種生長速度快、低溫下耐受性強具有較高經濟價值的海水魚類，在自然環境中種群數量較少，對其種質資源進行長期保存迫在眉睫。本研究以七帶石斑魚胚胎為實驗材料進行種質冷凍保存，探討超低溫冷凍(一196℃)對七帶石斑魚胚胎內超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、肌酸激酶(creatine kinase，CK)、N。+瓜+．ATPase、乳酸脫氫酶(1actate dehydrogenase，LDH)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)和谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH—PX)活性的影響，以檢測抗凍劑在冷凍保存中對胚胎的影響。本研究分別測定了經過PM(24％1，2一丙二醇(PG)+16％甲醇(MeOH))、PMG(15．75％1，2一丙二醇+8．75％甲醇(MeOH)+8．75％甘油(Gly))和PMGT(15．75％1，2一丙二醇+8．75％甲醇(MeOH)+8．75％甘油(Glv)+5％海藻糖(trehalose))3種玻璃化液處理冷凍前后七帶石斑魚胚胎內6種酶活性的變化。結

Sperm cryopreservation of sex-reversed seven-band grouper, Epinephelus septemfasciatus

作　　者：	Seven-band grouper Epinephelus septemfasciatus is a protogynous hermaphrodite. The male individuals’ number is more less than the female one. Thus, it is necessary for arti?cial reproduction and crossbreeding to research the sperm cryopreservation of sex-reversed seven-band grouper.
摘　　要：	Seven-band grouper Epinephelus septemfasciatus is a protogynous hermaphrodite. The male individuals’ number is more less than the female one. Thus, it is necessary for arti?cial reproduction and crossbreeding to research the sperm cryopreservation of sex-reversed seven-band grouper.

Sperm cryopreservation of sex-reversed seven-band grouper, Epinephelus septemfasciatus

作　　者：	Yongsheng Tiana,?, Wenshan Qia,b, Jing Jianga,b, Na Wanga, Di Wanga,c, Jieming Zhaid, Chao Chena, Songlin Chena,?
摘　　要：	Seven-band grouper Epinephelus septemfasciatus is a protogynous hermaphrodite. The male individuals’ number is more less than the female one. Thus, it is necessary for arti?cial reproduction and crossbreeding to research the sperm cryopreservation of sex-reversed seven-band grouper.

Long-term cryopreservation of sperm from Mandarin fish Siniperca chuatsi

作　　者：	Shuyan Dinga, Jiachun Gea,?, Chen Haoa, Mingsheng Zhanga, Weihui Yana, ZhiqiangXua, Jianlin Pana, Songlin Chenb, Yongsheng Tianb, YahongHuang
摘　　要：	In order to develop cryopreservation techniques for long-termpre-serving the sperm of Mandarin ?sh Siniperca chuatsi, we examined the effects of various extender and cryopreservation on post-thawmotility.

Effects of cryopreservation on the survival rate of the seven-band grouper (Epinephelus septemfasciatus) embryos

作　　者：	Yongsheng Tian a, , 1, Jing Jiang a, b, 1, Lini Song a, b, Zhangfan Chen a, Jieming Zhai c, Jiangchun Liu c, Na Wang a, Songlin Chen a,
摘　　要：	The effects of cryopreservation and the vitri?cation solution on the embryo hatchability of the seven- band grouper Epinephelus septemfasciatus were evaluated in this study. Six small molecule cryoprotec-tants (PG, MeOH, Gly, DMF, DMSO and EG) and four macromolecular cryoprotectants (glucose, fructose, sucrose and trehalose) were used to determine the embryo toxicity levels.

Cryopreservation of sperm from turbot (Scophthalmus maximus) and application to large-scale fertilization

作　　者：	Song-Lin Chena,*, Xiang-Shan Jia,b, Guo-Cai Yua, Yong-Sheng Tiana, Zhen-Xia Shaa
摘　　要：	This paper reports on cryopreservation of sperm from turbot (Scophthalmus maximus). The effects of various extenders, cryoprotectants and sperm–egg insemination ratios on motility score and/or fertilization capacity of post-thaw turbot spermatozoa were examined to optimize cryopreservation procedures.

Cryopreservation of spotted halibut (Verasper variegatus) sperm

作　　者：	Y.S. Tian a, S.L. Chen a,?, X.S. Ji b, J.M. Zhai c, L.J. Sun c, C. Chen a, P.Z. Su a
摘　　要：	Spotted halibut (Verasper variegatus) is now regarded as being endangered in China because of its continuous decline in the last three decades. Preservation and protection of its genetic resources were demanded in order to protect this rare ?sh species

Cryopreservation of sea perch (Lateolabrax japonicus) spermatozoa and feasibility for production-scale fertilization

作　　者：	X.S. Jia, S.L. Chena,b,*, Y.S. Tiana, G.C. Yua, Z.X. Shaa, M.Y. Xua, S.C. Zhangc
摘　　要：	With the objective of germplasm conservation and cryobank construction, a method for cryopreserving sea perch (Lateolabrax japonicus, Cuvier) semen in 1.8-ml cryovials was developed. The effects of various extenders, cryoprotectants, volume of diluted semen on the motility score of post-thaw spermatozoa were examined.

云紋石斑魚心臟細胞系的建立與鑒定

作　　者：	劉肖峰陳松林沙珍霞吳婭紅于洋王娜修旺珊2
摘　　要：	魚類細胞系在魚類病毒學及功能基因組學方面發揮著重要作用。云紋石斑魚(Epinephelusmoara) 是一種具有重要養殖價值的海水魚類，尚未見細胞系建立的報道。本研究以云紋石斑魚的心臟組織為材料，建立了云紋石斑魚心臟細胞系

半滑舌鰨脾臟"卵巢組織細胞離體培養的初步研究

作　　者：	鄭媛陳松林
摘　　要：	44半滑舌鰨#-$)#133233,:"1&,F"3$ 屬鰈形目#60>=?/C>23;Q/?9>A$ " 舌鰨科#-@C/E0/AA;B:>$ " 舌鰨屬#-@C/E0/AA=A$ " 俗稱牛舌頭% 鰨目% 鰨米" 是一種暖溫性近海大型底層魚類"終年生活棲息在我國近海海區&1'"具廣溫%廣鹽和適應多變的環境條件的特點( 半滑舌鰨市場價值高"但自然資源量少"是我國新開發的重要海水養殖魚類

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